熒光增白劑在底物中的濃度一般都非常低，精確地測定它的濃度盡管非常重要，但非常困難。在這方面，化學分析的方法一般不適用。較為常用的方法是比色分析，即在紫外燈下，同時觀測待測樣品(固體的、液體的均可)與已知濃度的標準品，根據它們的熒光亮度判別待測樣品的濃度。這個方法盡管非常簡便，但是完全憑觀察者的眼睛進行評判具有精確度不高的缺陷，因此可以利用分光光度計進行這種比色分析，這種分析方法稱為紫外分光光度法。它在熒光增白劑的生產和應用過程中使用得較為普遍，是對熒光增白劑進行定性和定量分析的重要手段。

熒光增白劑的較大吸收波長一般在330~400nm之間，見圖14-1，圖中4種熒光增白劑的結構見式(14-1)。

紫外分光光度計測定的是熒光增白劑溶液的吸收強度E，吸收強度E與樣品的含量在一定范圍內成正比，可用Lambert-Beer定律表達

若c為質量分數，且為1%，溶液的厚度d= 1cm,則此時的消光系數K為質量百分消光系數,對特定的熒光增白劑，它是一個常數。一旦獲得這個常數，就可以通過測定濃度在一定范圍內的樣品的吸收強度E,推算出該樣品的實際濃度。按照LambertBeer定律的定義，樣品的質量濃度范圍應為0.01~1g/L溶劑，對應的吸收強度E應在0.2~0.8范圍內。

為了測定一個熒光增白劑的含量，假定它的原始體積為V(mL)，則首先將其稀釋到VI (mL)， 取一個厚度d=1cm的比色皿，若此時測得的吸收強度E的數值位于0.2~0.8范圍內，則該熒光增白劑的含量c可用下式計算

含乙烯結構的熒光增白劑存在順反異構現象，一般在正常情況下它們呈反式構造，但是曝露在紫外光或日光下有可能轉變為順式構型。這種變化會干擾上述分析的準確度，因此對這類物質的分析較好在避光的條件下進行。有些此類熒光增白劑的順反異構現象有一個等當點，見圖14-2所示的吸收曲線。

對于有此現象的熒光增白劑，在進行紫外分析時可以選擇位于等當點的波長作為檢測波長，它的優點是分析結果不受熒光增白劑順反異構現象的干擾。